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MDA-MB-436 人乳腺癌細(xì)胞傳代/復(fù)蘇技巧
點(diǎn)擊次數(shù):431 更新時(shí)間:2024-04-07

MDA-MB-436 人乳腺癌細(xì)胞

Human Breast Cancer Cells

貨號(hào):YJ-h036(STR鑒定)

價(jià)格: 1500.0

規(guī)格: 1*106 

細(xì)胞描述

該細(xì)胞源于一名43歲患有乳腺腺癌女性的胸腔積液,細(xì)胞呈多形性,大多數(shù)細(xì)胞在間接免疫熒光染色時(shí)呈現(xiàn)與抗微管抗體的強(qiáng)烈反應(yīng)。

細(xì)胞特性

1 來(lái)源:人,女性,乳腺腺癌胸水轉(zhuǎn)移灶

2 形態(tài):有多核成分的多形細(xì)胞,貼壁生長(zhǎng)

3 含量:>1x10^6  細(xì)胞數(shù)

4 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5 用途:僅供科研使用。

運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

11mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

2T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理:

1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2)請(qǐng)?jiān)?/span>45X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上,可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶12傳代 。 

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備L15 基礎(chǔ)培養(yǎng)基                 YJ-0009                          89%

     優(yōu)質(zhì)胎牛血清                            YJ-0500                         10%

     P/S青霉素-鏈霉素                     YJ-15140-122                1%

     谷胱甘肽(還原型)                YJ-8180                           16ug/ml

      胰島素                                      YJ-0016-a)                           0.01mg/ml

2)注意事項(xiàng):

a 該細(xì)胞不能用胰酶消化,傳代時(shí),使用細(xì)胞刮鏟輕輕把細(xì)胞刮下來(lái)。抽出細(xì)胞液離心后傳到新的培養(yǎng)瓶中。

b L-15培養(yǎng)基配方設(shè)計(jì)用于與大氣進(jìn)行自由氣體交換。使用該培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用空氣100%CO 2和空氣混合物對(duì)細(xì)胞有害。如果沒(méi)有條件準(zhǔn)備空氣氣相100%的培養(yǎng)箱的,可以采用不透氣密封蓋的T25培養(yǎng)瓶來(lái)培養(yǎng),培養(yǎng)過(guò)程中每天將細(xì)胞拿出培養(yǎng)箱換1-2次空氣。

3) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,100%; 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

4) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二. 細(xì)胞處理:

1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

可以通過(guò)將貼壁細(xì)胞用細(xì)胞刮鏟刮入含有漂浮細(xì)胞的培養(yǎng)基中,通過(guò)離心收集細(xì)胞,將細(xì)胞沉淀重懸于新鮮培養(yǎng)基中并分配到新的培養(yǎng)瓶中來(lái)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代。建議收貨后的第一次傳代密度為1:2進(jìn)行。后續(xù)的傳代可根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:4的比例進(jìn)行。

3) 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

MDA-MB-436 人乳腺癌細(xì)胞.png


下面T25瓶為例;

1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程(使用細(xì)胞刮鏟收取細(xì)胞)收集細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱(chēng)、代數(shù)、日期等信息。

將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過(guò)夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項(xiàng)

1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

2.收到細(xì)胞先不開(kāi)瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷(xiāo)售依據(jù)。

3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐WC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。

4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 

2011年開(kāi)始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及論文潤(rùn)色服務(wù),協(xié)助客戶各類(lèi)實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色十多年,是您值得信賴(lài)的科研合作伙伴!

如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無(wú)法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

 

實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù):

 


滬公網(wǎng)安備 31011802001676號(hào)

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