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U251MG/TMZ+luc人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫唑胺細(xì)胞
點(diǎn)擊次數(shù):481 更新時(shí)間:2024-08-28

U251MG/TMZ+luc人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫唑胺細(xì)胞

Human astroglioma resistant temozolomide cells ,U251 MG/TMZ+luc

貨號(hào):YJ-h244(STR(U251MG鑒定))

價(jià)格: 3200.0

規(guī)格: 1*10 6

細(xì)胞介紹

該細(xì)胞由U251MG/TMZ細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。

細(xì)胞特性

1)來源:U251MG/TMZ

2)形態(tài):上皮細(xì)胞樣,貼壁生長(zhǎng)

3)含量:>1*10 6細(xì)胞數(shù)

4)規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)用途:僅供科研使用。


細(xì)胞運(yùn)輸、保存及注意事項(xiàng)


復(fù)蘇細(xì)胞

凍存細(xì)胞

包裝

充液的T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

1mL凍存管

運(yùn)輸條件

常溫

干冰

保存方式

75%酒精消毒瓶壁,置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱

-80℃冰箱中保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮/立即復(fù)蘇

注意事項(xiàng)

1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、漏液及細(xì)胞有污染;或凍存管有破損,融化、漏液等,請(qǐng)立即拍照并聯(lián)系我們。照片包括細(xì)胞培養(yǎng)瓶/凍存管外觀,顯微鏡下細(xì)胞照片(100倍,200倍各2張);

2. 若收到的復(fù)蘇細(xì)胞有少量細(xì)胞脫落、飄起,可能由于運(yùn)輸途中導(dǎo)致。請(qǐng)先于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置2~3h后,再進(jìn)行處理;

3. 復(fù)蘇細(xì)胞的充液培養(yǎng)基為不含藥物的維持培養(yǎng)基,血清濃度較低,收到細(xì)胞后請(qǐng)及時(shí)更換為完全培養(yǎng)基;

4. 建議收到細(xì)胞后,首先進(jìn)行擴(kuò)增(至少3代),并凍存部分細(xì)胞以備用。

5. 細(xì)胞傳代或凍存過程中,不可使用含有藥物的培養(yǎng)基。

細(xì)胞培養(yǎng)試劑的配制

1TMZ藥物的配制及保存

建議將TMZ藥物配制成16mg/mL的母液:即使用1mL DMSO溶液溶解16mg TMZ藥物,使其完全溶解。(若所購(gòu)買的TMZ藥物規(guī)格為10mg,則加入625uL DMSO溶液,待其完全溶解即為16mg/mL母液)

注意:可根據(jù)用量配置藥物,并將藥物分裝保存,避免反復(fù)凍融導(dǎo)致藥物失效。溶解后的TMZ4℃保存1周,-20℃保存1個(gè)月,-80℃保存6個(gè)月。

2)凍存液的配制

90%優(yōu)質(zhì)胎牛血清+10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

3)完全培養(yǎng)基的配制(推薦使用YJ-h244-001b

成分

體積/濃度

優(yōu)質(zhì)胎牛血清

10%

雙抗

1%

16ug/mL TMZ

0.1%母液(16mg/mL

DMEM培養(yǎng)基

補(bǔ)充至所需體積

細(xì)胞培養(yǎng)條件

氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%; 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%~80%

細(xì)胞處理

1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4~6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,1000rpm/min離心3~5min,棄去上清液。加入1mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后,均勻鋪于含6~8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中,置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,2~3day換液。

注意:細(xì)胞復(fù)蘇過程中,不可使用含有藥物的培養(yǎng)基。須在細(xì)胞完全貼壁,形態(tài)完全展開,生長(zhǎng)狀態(tài)穩(wěn)定后,方可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要添加TMZ藥物。若加藥后細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)較為緩慢,可適當(dāng)降低TMZ的濃度,或使用不含TMZ的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)較好時(shí),再更換為所需的TMZ濃度;

建議復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)始終穿戴防護(hù)手套和面罩,避免凍存管因溫差較大而發(fā)生爆炸,造成人員傷害。

2)細(xì)胞傳代(建議以同等底面積的培養(yǎng)瓶/皿按照12比例傳代)

待細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時(shí),即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1次,吸凈殘余的PBS

加入適當(dāng)體積的0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25-1mL,其它培養(yǎng)器皿可覆蓋培養(yǎng)底面即可),置于37℃培養(yǎng)箱中消化2~5min,顯微鏡下觀察細(xì)胞細(xì)胞大部分變圓并脫落,即可輕拍培養(yǎng)瓶使細(xì)胞全部脫落。迅速拿回操作臺(tái),加入2倍體積的、含10%FBS的培養(yǎng)基中止消化。

將細(xì)胞懸液移入離心管中,1000rpm/min離心5min,棄去上清液。

向細(xì)胞沉淀中加入1~2mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,輕吹混勻。將細(xì)胞懸液按11的比例均勻鋪于2個(gè)新的培養(yǎng)瓶/皿中,添加6~8mL完全培養(yǎng)基,置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,2~3day換液。

注意:細(xì)胞傳代過程中,不可使用含有藥物的培養(yǎng)基。須在細(xì)胞完全貼壁,形態(tài)完全展開,生長(zhǎng)狀態(tài)穩(wěn)定后,方可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要添加TMZ藥物。若加藥后細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)較為緩慢,可適當(dāng)降低TMZ的濃度,或使用不含TMZ的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)較好時(shí),再更換為所需的TMZ濃度。

3)細(xì)胞凍存

細(xì)胞凍存時(shí),步驟同2)細(xì)胞傳代的①~④,細(xì)胞計(jì)數(shù)后,加入配制好的細(xì)胞凍存液,重懸細(xì)胞,按照1×106 ~ 1×107個(gè)細(xì)胞/mL分配到一個(gè)凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80℃冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

細(xì)胞篩選

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染luc的細(xì)胞,隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加,其luc熒光強(qiáng)度逐漸減弱。若要維持熒光強(qiáng)度,需加入嘌呤霉素進(jìn)行篩選。

初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時(shí),建議加入終濃度為1ug/mL嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng),若無細(xì)胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/mL嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/mL。若篩選過程中,漂浮細(xì)胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),至細(xì)胞密度約80%,可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當(dāng)加入5ug/mL嘌呤霉素時(shí)細(xì)胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

U251MG/TMZ+luc人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫唑胺細(xì)胞


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實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù):



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