欧美一级黄色片免费看丨91看毛片丨亚洲国产成人久久综合碰碰丨久激情内射婷内射蜜桃人妖丨香蕉网站视频丨国产成人精品日本亚洲网站丨日韩精品影视丨九九久久99丨秋霞中文字幕丨毛片av网址丨youjizzcom国产丨91在线最新丨天天视频亚洲丨日韩一区二区三区射精-百度丨日韩精品极品视频在线丨男女艹逼网站丨午夜美女国产毛片福利视频丨国产精成人品日日拍夜夜丨精品国产青草久久久久福利丨日本ww色

LGS1082W牛外周血造血干細(xì)胞分離液說(shuō)明書(shū)

牛外周血造血干細(xì)胞分離液說(shuō)明書(shū)
【產(chǎn)品規(guī)格】
200ml/Kit
【產(chǎn)品組成】
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：

【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
A．適用儀器
zui大離心力可達(dá) 1200g的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
B．耗材

【檢驗(yàn)方法】
全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
首先取抗凝血按體積比 1:1的比例加樣本稀釋液（產(chǎn)品編號(hào)：2010C1119）混勻，
根據(jù)稀釋后的樣本量大小，分以下兩種情況：
情況 A：稀釋后的血液樣本量小于5ml 時(shí)，實(shí)驗(yàn)方法如下：
1.取一支15ml離心管，先加入與稀釋后樣本等量的分離液（注：分離液zui少不得少于  3ml）。
2.用吸管小心吸取稀釋后的血液樣本加于分離液液面上，400-500g，離心20-30min（注：
根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液樣本量越多，離心力越大，離心時(shí)間越長(zhǎng)，具體離
心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到分離效果）。
 3.離心后，此時(shí)離心管中由上至下分為四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色目的

細(xì)胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。
4.用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色目的細(xì)胞層到另一 15ml離心管中，往所得離心管中
加入 10ml清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118），混勻細(xì)胞。
5. 250g，離心 10min。
6.棄上清。
7.用吸管以5ml清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118）重懸所得細(xì)胞。
8. 250g，離心 10min。
9.重復(fù)  6、7、8，棄上清后以 0.5ml后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。
10.差異貼壁法純化細(xì)胞
（1）用干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基或干細(xì)胞*培養(yǎng)基以 1.5-3×10 6個(gè)/ml的密度重懸細(xì)胞，將細(xì)胞鋪于一次性細(xì)胞板或細(xì)胞瓶中，放于 37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。
（2）2-4小時(shí)內(nèi)貼壁的為巨噬細(xì)胞前體（俗稱(chēng)為單核細(xì)胞）。
（3）10-24小時(shí)內(nèi)貼壁的單個(gè)核細(xì)胞為內(nèi)皮、內(nèi)皮祖細(xì)胞、干細(xì)胞。
（4）不貼壁的為淋巴細(xì)胞。
注：
a)
無(wú)血清培養(yǎng)基中不含任何動(dòng)物成分，為得到更佳培養(yǎng)效果可添加10%自體血漿或
2-8% 經(jīng)篩選的胎牛血清。
b)
c)
*培養(yǎng)基中含 2-20% 胎牛血清（血清具體含量由所培養(yǎng)的目的細(xì)胞而定）。
由于每種細(xì)胞的貼壁時(shí)間存在差異可將所得細(xì)胞分開(kāi)已達(dá)簡(jiǎn)單的純化目的，此法成
本相對(duì)較低。如需獲得高純度目的細(xì)胞則需在使用分離液后選用免疫磁珠陽(yáng)性或陰
性分選。
情況 B：稀釋后的血液樣本量大于等于 5ml時(shí)，實(shí)驗(yàn)方法如下：
1.取一支適當(dāng)?shù)碾x心管，先加入與稀釋后樣本等量的分離液。
2.將經(jīng)稀釋后的血液樣本小心加于分離液之液面上，450-650g（zui大離心力可至 1000g），
離心 20-30min。（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液量越多，離心力越大，離心
時(shí)間越長(zhǎng)，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到分離效果。加入血液樣本后，樣
本及分離液總體積不得超過(guò)離心管總體積的三分之二）。
3.剩余步驟同“情況  A”中步驟 3至步驟  10。
  【注意事項(xiàng)】

1.全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在   20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，
在取血 2h內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，血液存放時(shí)間越長(zhǎng)，細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過(guò)   6h
后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。
2.本實(shí)驗(yàn)不使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無(wú)靜電、低靜電離心
管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品，因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會(huì)
變成毛面，影響細(xì)胞分離效果。
3.吸取過(guò)多的目的細(xì)胞層及分離液層會(huì)導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒
細(xì)胞數(shù)量增加。
4.吸取過(guò)多的目的細(xì)胞層上層溶液會(huì)導(dǎo)致血漿蛋白及血小板混雜。
5.分離液用量大于稀釋后的血液樣本時(shí)，分離效果更佳。
6.如實(shí)驗(yàn)后干細(xì)胞得率或活性過(guò)低，請(qǐng)以尋求幫助。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
18-25℃保存，有效期 2年。本品易感染細(xì)菌，需無(wú)菌條件操作。無(wú)菌條件下操作，啟
封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
【參考值（參考范圍）】
本實(shí)驗(yàn)外周血干細(xì)胞提取率大于 80%。
下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例，用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。

【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】
1.所獲得干細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。
2.所獲得干細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。
3.所獲得干細(xì)胞的鑒定方法
A.流式細(xì)胞技術(shù)
B.免疫組化技術(shù)
C.原位雜交技術(shù)
D.PCR技術(shù)

注：上述技術(shù)方案詳情請(qǐng)登陸本搜索“細(xì)胞分離、
純化、擴(kuò)增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊(cè)”，并在說(shuō)明書(shū)項(xiàng)目欄下下載使用。
【可能存在的問(wèn)題及解決方法】
1.由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問(wèn)題及解決方案如下表所示：

2.本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地
區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對(duì)離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)，恒定離
心時(shí)間，對(duì)離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。
3.本分離液依照標(biāo)準(zhǔn)，全部使用藥用級(jí)原料，性能指標(biāo)與國(guó)產(chǎn)同類(lèi)產(chǎn)品略有不同，可
能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不*的情況，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。
注：在對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g為基數(shù)，直至達(dá)到分離效果，
離心力zui小不得小于 400g，zui大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min為準(zhǔn)。