牛出血性敗血癥（Pasteurellosis）ELISA試劑盒說明書 |
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本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷 牛（Bovine）出血性敗血癥（Pasteurellosis）ELISA檢測試劑盒使用說明書 檢測原理 試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被出血性敗血癥（pasteurellosis-Ag）抗原微孔中，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測抗原，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中出血性敗血癥（Pasteurellosis）的存在與否。 樣品收集、處理及保存方法 1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。 5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 自備物品 1. 酶標(biāo)儀（450nm） 2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37℃恒溫箱 操作注意事項 1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。 2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。 3. 預(yù)處理后的樣本請按照操作步驟用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋以達(dá)到試劑盒的的最佳檢測效果。 4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。 5. 所有液體組分使用前充分搖勻。 試劑盒組成
試劑的準(zhǔn)備 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。 洗板方法 1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。 2. 自動洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。 操作步驟 1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。 2. 設(shè)置陰、陽性對照孔和樣本孔，陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL； 3. 待測樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL； 4. 隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗原100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。 5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。 6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。 7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。 結(jié)果判斷 1. 試驗有效性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00； 陰性對照孔OD值平均值≤0.15。 2. 臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15 3. 陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性 4. 陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性 試劑盒性能 1. 準(zhǔn)確性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；陰性對照孔OD值平均值≤0.15，說明試驗結(jié)果有效。 2. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。 3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。 4. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。 5. 有效期：6個月
實驗代做服務(wù)：
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