欧美一级黄色片免费看丨91看毛片丨亚洲国产成人久久综合碰碰丨久激情内射婷内射蜜桃人妖丨香蕉网站视频丨国产成人精品日本亚洲网站丨日韩精品影视丨九九久久99丨秋霞中文字幕丨毛片av网址丨youjizzcom国产丨91在线最新丨天天视频亚洲丨日韩一区二区三区射精-百度丨日韩精品极品视频在线丨男女艹逼网站丨午夜美女国产毛片福利视频丨国产精成人品日日拍夜夜丨精品国产青草久久久久福利丨日本ww色

凋亡因子Caspase-389檢測實驗

Caspase3

Caspase是- -個在細胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase3也稱CPP32, 是細胞凋亡過程中的一個關鍵酶，可以剪切procaspase2.6. 7和9，并可以直接特異性剪切許多caspase底物，包括PARP (poly(ADP-ribose) polymerase), ICAD (Inhibitor of caspase-activated Deoxyri- bonuclease), gelsolin和fodrin等。 這些由caspase 3介導的蛋白剪切是細胞凋亡分子機制的重要組成部分。caspase 3在細胞核凋亡過程中也起到了關鍵作用，包括染色質固

縮，DNA的**片段化等。同時caspase 3對細胞起泡(Cell blebbing)也起到關鍵作用。

檢測原理基于casepase 3可以催化底物AC-DEVD-pNA產生黃色的pNA(-itroaniline),從而可以通過測定吸光度來檢測caspase 3的活性。pNA在405nm附近有強吸收。參照黃色產物pNA制作的標準曲線，可以作為定量caspase 3酶活性的標準品。

Caspase-8

Caspase 8通常以酶原的形式存在，在細胞凋亡的信號轉導過程中被激活，Caspase 8被認為是細胞凋亡信號轉導過程中上游的caspase,在Fas-receptor和TNFR-1介導的細胞凋亡 過程中caspase 8被激活,形成一個由p18和p10組成的二聚體，進一步激活下游的caspase 4, caspase 6。caspase 9和caspase 10。本方法基于Caspase 8可以催化底物AC-IETD-pNA產生黃色的pNA (-nitraniline),從而可以通過測定吸光度來檢測Caspase 8的活性。pNA在405nm附近有強吸收。 檢測樣本的405nm OD值參照pNA制作的標準曲線，可以計算樣品的Caspase 8酶活性。

Caspase-9

Caspase 9也稱ICE-LAP6或Mch6,是細胞凋亡信號轉導過程中上游的caspase。線粒體釋放細胞色素c以后，caspase 9可以和細胞色素c以及Apaf1形成復合物，同時被激活。激活的caspase 9可以激活細胞凋的關鍵酶caspase 3,從而促進后續的細胞凋亡信號。Caspase 9的激活可以通過磷酸化進行調控。

本方法基于Caspase 9可以催化底物Ac- LEHD -pNA產“生黃色的pNA (p-nitroaniline),從而可以通過測定吸光度來檢測

Caspase 9的活性。pNA在405nm附近有強吸收。檢測樣本的405nm OD值參照pNA制作的標準曲線，可以計算樣品的Caspase 9酶活性。

Caspase1

Caspase2

Caspase4

Caspase6

凋亡因子Caspase 3/8/9檢測樣本準備:

1)細胞樣品:取1x107個細胞(約1個T25的培養瓶細胞量) , 600g 4°C離心5分鐘收集細胞，小心吸除上清，PBS洗滌一次。吸取上清后，每管細胞樣品加入100u|裂解液重懸沉淀,冰浴裂解15分鐘。4°C 16,000g離心10-15分鐘， 把上清轉移到冰浴預冷的離心管中。立即測定caspase 3的酶活性或-70°C保存樣品。同時可以取少量樣品用Bradford法測定蛋白濃度，盡量使蛋白濃度達到1-3mg/ml.

2)組織樣品:約每10mg組織加入100ul裂解液，在冰浴上用玻璃勻漿器勻漿。然后把勻漿液轉移到1 .5ml)離心管中，冰浴再裂解5分鐘。4°C 16,000g離心10-15分鐘，把上清轉移到冰浴預冷的離心管中。立即測定caspase 3的酶活性或-70°C保存

樣品。同時可以取少量樣品用Bradford法測定蛋白濃度，盡量使蛋白濃度達到1-3mg/ml.

Caspase-3活性檢測標準曲線

實驗周期: 7-10個工作日內完成，重復檢測優惠。

客戶注意事項

1.抗體:事先咨詢上海研謹生物，明確抗體種屬以及是否有該抗體可使用。如無可由雙方協商而定，客戶自己購買提供或我公司代購;

2.標本收集與保存:

①組織樣品:新鮮組織放入液氮或70度保存,組織不少于100mg (約綠豆大小) ;

②培養細胞:通過細胞計數取不少于000000個細胞于EP管，加入0.5ml生理鹽水或蛋白保護劑，混勻后保存于冰箱(-70°C，避免反復凍融) ;

③血液細胞標本:以抗凝管保存血樣或以淋巴細胞分離液分離細胞后加入0.5ml生理鹽水或蛋白保護劑，保存(-70°C可長期保存，避免反復凍融)

④血清或細胞培養液標本:離心去掉雜質后取上清入EP管，保存(以上4°C可保存15-20天，-70°C可長期保存，避免反復凍融)

3、樣本運輸:可選以下任何的一種方式寄送標本

①組織樣本、細胞樣本以干冰運輸或加入蛋白保護劑后加冰袋運輸;

②細胞樣本也可以直接快件寄送培養瓶(密封保證不污染，培養液不漏出,細胞不要長得太滿，50%左右,灌滿培養液) ;

③血清或上清液直接加冰袋寄送(密封保證液體不漏出，視路途遠近2-3天可到達)。

實驗代做服務：